Charakteristiky a úroveň exprese transgenů v rostlinných transformantech modifikovaných jedním konstruktem s genem pro inhibitor proteáz - Bezunk, František (Jihočeská univerzita, 2009)
Rostliny tabáku byly transformovány bakteriemi Agrobacterium tumefaciens s plazmidovým konstruktem nesoucím fúzní gen SPI2:GFP a selektovatelný znak rezistence rostlin ke kanamycinu (NPTII). Gen SPI2:GFP byl vytvořený fúzí genů SPI2 (kódujícího inhibitor proteáz serinového typu) a GFP (pro zeleně fluoreskující protein - ''green fluorescent protein''). Selekce transgenních tabáků byla provedena na médiu s kanamycinem. U vyselektovaných jedinců byly stanoveny a statisticky vyhodnoceny štěpné poměry. Přítomnost a funkčnost transgenní DNA byla ověřena metodami PCR, RT-PCR, Western blot a studiem exprese reportérového genu GFP na základě fluorescence v rostlinách transformantů T0 a T1 generace pomocí stereomikroskopu se speciálním nástavcem pro GFP. Byla zjištěna nízká úroveň exprese reportérového genu GFP, která byla pravděpodobně způsobena, při tvorbě fúzního genu, odstraněním části sekvence zodpovědné za transport transgenního proteinu do endoplazmatického retikula. Jako výstup této diplomové práce prováděné v rámci projektu Výzkumných center MŠMT 1 M06030 byly získány transgenní genotypy Nicotiana tabacum, cv. Petit Havana, SR1 WT, u nichž byla prokázána exprese transgenní DNA na úrovni syntézy mRNA a fluorescence produktu reportérového genu GFP.
Characteristics and gene expression levels of plant transformants modified by one related constructs shearing a gene for proteinase inhibitor.
Keywords: transformace rostlin; tabák; exprese transgenu; GFP; inhibitory proteáz; NPTII; plant transformation; tobacco; transgene expresssion; GFP; protease inhibitors; NPTII