Vliv syntetického progestinu etonogestrelu na sekundární pohlavní znaky a histologii gonád živorodky Wingeovy (Poecilia wingei)

Abstract

Syntetické progestiny jsou steroidní hormony, které jsou nejen součástí hormonální antikoncepce, ale používají se i při léčbě řady zdravotních problémů. Díky širokému používání léků na bázi progestinů nacházíme jejich rezidua v odpadních vodách, odkud se následně dostávají do čistíren odpadních vod a do vod povrchových. Cílem této diplomové práce bylo posoudit, zda má syntetický progestin etonogestrel vliv na sekundární pohlavní znaky a histologii gonád živorodky Wingeovy (Poecilia wingei). Během experimentu byly samci a samice odděleně, vystaveny 3,2 a 320 ng.l-1 etonogestrelu po dobu 34 dní. Jako kontrola sloužila skupina ryb chovaných v čisté vodě (K) a skupina ryb chovaných v čisté vodě obsahující rozpouštědlo dimethylsulfoxid (KS). Na konci testu byly všechny ryby vyfotografovány, aby byly zachyceny případné změny v jejich zbarvení. Poté byly ryby usmrceny a fixovány v 10 % pufrovaném formalínovém roztoku pro morfometrickou a histologickou analýzu. Vzorky ryb odebrané pro morfometrickou analýzu byly vyfotografovány s pomocí softwaru QuickPHOTO MICRO 2.3 a na zhotovených snímcích byly měřeny jednotlivé morfometrické parametry. Zpracování vzorků ryb pro histologickou analýzu zahrnovalo dekalcifikaci, dehydrataci a následně zalití vzorků do parafínových bločků. Z parafinových bločků se poté zhotovily řezy o tloušťce cca 4,5 um, které byly obarveny hematoxylinem a eosinem. Na takto připravených histologických vzorcích se zjišťovaly histologické změny gonád. U samic exponovaných etonogestrelu byl v obou koncentracích pozorován výskyt barevných skvrn, které jsou charakteristické pro samce a u samic indikují maskulinizaci. Navíc samice vystavené koncentraci 320 ng.l-1 vykazovaly změnu morfometrie anální ploutve do struktury podobné gonopodiu (modifikovaná anální ploutev samců sloužící jako pomocný kopulační orgán), což je znak, který rovněž ukazuje na maskulinizaci. Dále expozice etonogestrelu jak v nižší, tak i ve vyšší koncentraci snížila zastoupení zralých oocytů v ováriích, přičemž jejich výskyt se snižoval s rostoucí koncentrací. U samců exponovaných etonogestrelu byl v obou koncentracích zjištěn menší poměr 4. paprsku k délce 6. paprsku gonopodia. V koncentraci etonogestrelu 320 ng.l-1 byl navíc pozorován větší poměru délky 6. paprsku k délce těla a prodloužení délky 6. paprsku. Ačkoli nedošlo k takovým změnám, které by indikovaly hypermaskulinizaci, mohly by tyto změny mít negativní vliv na reprodukci, případně pohlavní výběr ze strany samic. Expozice etonogestrelu neměla žádný vliv na běžný vývoj testes, neboť se u samců ze všech skupin vyskytovaly převážně zralé spermatofory. Na základě těchto poznatků lze konstatovat, že etonogestrel, podobně jako jiné progestiny, představuje reálné riziko pro ryby, pokud se vyskytne ve vodním prostředí v koncentracích pohybujících se už v jednotkách ng.l-1.