| dc.contributor.advisor | Chmelař, Jindřich | |
| dc.contributor.author | Ederová, Monika | |
| dc.date.accessioned | 2025-03-06T08:06:23Z | |
| dc.date.available | 2025-03-06T08:06:23Z | |
| dc.date.issued | 2022 | |
| dc.date.submitted | 2022-04-13 | |
| dc.identifier.uri | https://dspace.jcu.cz/handle/20.500.14390/46263 | |
| dc.description.abstract | Do P1 místa serpinu Iripin-1 pocházejícího ze slin klíštěte Ixodes ricinus byla pomocí specifických primerů zavedena bodová mutace zaměňující arginin za tryptofan. Protein obsahující tuto mutaci byl exprimován v chemicky kompetentních buňkách Escherichia coli. Následně byl z těchto buněk extrahován a přečištěn pomocí afinitní a rozměrově-vylučovací chromatografie. Aby byl ověřen dopad zavedené bodové mutace, byla otestována schopnost získaného proteinu tvořit kovalentní komplexy s trypsinem. | cze |
| dc.format | 62 s. (96 326 znaků) | |
| dc.format | 62 s. (96 326 znaků) | |
| dc.language.iso | cze | |
| dc.publisher | Jihočeská univerzita | cze |
| dc.rights | Bez omezení | |
| dc.subject | proteázy | cze |
| dc.subject | inhibitory proteáz | cze |
| dc.subject | klíštěcí sliny | cze |
| dc.subject | serpiny | cze |
| dc.subject | rekombinantní proteiny | cze |
| dc.subject | mutageneze | cze |
| dc.subject | exprese proteinu | cze |
| dc.subject | chromatografie | cze |
| dc.subject | elektroforéza | cze |
| dc.subject | Western blot | cze |
| dc.subject | proteases | eng |
| dc.subject | protease inhibitors | eng |
| dc.subject | tick saliva | eng |
| dc.subject | serpins | eng |
| dc.subject | recombinant proteins | eng |
| dc.subject | mutagenesis | eng |
| dc.subject | protein expression | eng |
| dc.subject | chromatography | eng |
| dc.subject | elecrophoresis | eng |
| dc.subject | Western blot | eng |
| dc.title | Příprava mutantního serpinu z klíštěte <i>Ixodes ricinus</i> | cze |
| dc.title.alternative | Mutagenesis of a serpin from the tick <i>Ixodes ricinus</i> | eng |
| dc.type | diplomová práce | cze |
| dc.identifier.stag | 64564 | |
| dc.description.abstract-translated | Point mutation altering arginin for tryptophan amino acid residue in P1 site of tick salivary serpin Iripin-1 was created using specific primers. Recombinant protein with this mutation in nucleotide sequence was then expressed in chemically competent Escherichia coli cells, extracted from them and purified by affinity and size-exclusion chromatography. To see the impact of the mutation on inhibitory function of Iripin-1, its ability to bind trypsin and form covalent complexes was evaluated. | eng |
| dc.date.accepted | 2022-05-23 | |
| dc.description.department | Přírodovědecká fakulta | cze |
| dc.thesis.degree-discipline | Klinická biologie | cze |
| dc.thesis.degree-grantor | Jihočeská univerzita. Přírodovědecká fakulta | cze |
| dc.thesis.degree-name | Mgr. | |
| dc.thesis.degree-program | Biologie | cze |
| dc.description.grade | Dokončená práce s úspěšnou obhajobou | cze |
| dc.description.defence | <p>Obhajoba probíhala hybridně přes MS Teams. Vzdáleně byl přítomen oponent Dr. Kotál. Komise se sešla ve stejném složení jako ve schváleném návrhu.<o:p></o:p></p>
<p>1. Studentka představila výsledky své práce během 20 minut.<o:p></o:p></p>
<p>2. Školitel přečetl svůj posudek a se studentkou byl spokojen.<o:p></o:p></p>
<p>3. Předseda komise vyzval oponenta Dr. Frantu k přečtení posudku.<o:p></o:p></p>
<p>4. Dr. Franta přečetl posudek, své komentáře, připomínky a vznesl dotazy:<o:p></o:p></p>
<p>Přítomnost metalloproteáz ve slinných žlázách klíštěte. Latentní a nativní forma serpinů. Optimální teplota pilotní exprese. Volba roztoků pro solubilizaci proteinu. Malá účinnost transformace a colony PCR. Celkové množství získaného mutantního serpinu. <o:p></o:p></p>
<p>5. Studentka zodpověděla dotazy ke spokojenosti oponenta.<o:p></o:p></p>
<p>6. Předseda komise vyzval oponenta Dr. Kotála k přečtení posudku.<o:p></o:p></p>
<p>7. Dr. Kotál přečetl posudek, své komentáře, připomínky a vznesl dotazy:<o:p></o:p></p>
<p>Ireverzibilní inhibitory proteáz. Molekuly vázající se na serpiny mimo reaktivní smyčku. Exprese mutantního serpinu bez signálního peptidu. Ztráty solubilního proteinu a zlepšení výtěžku. Analýza výstupu z afinitní chromatografie. Analýza obrázku 26. <o:p></o:p></p>
<p>8. Studentka zodpověděla dotazy ke spokojenosti oponenta.<o:p></o:p></p>
<p>9. Diskuze nad dotazy komise (afinitní chromatografie).<o:p></o:p></p>
<p>9. Komise hlasovala 5x výborně, průměr 1,00, čili konečné hodnocení výborně.<o:p></o:p></p> | cze |
