Motolice čeledi Gymnophallidae na Svalbardu

Abstract

Tato bakalářská práce se zabývá molekulárně biologickým potvrzením předpokládaného životního cyklu motolice čeledi Gymnophallidae. Mezihostiteli jsou mlži Mya truncata, Hiatella arctica a definitivním hostitelem je kajka mořská Somateria mollissima. Fixované vzorky motolic byly přivezeny ze Svalbardu, kde byly izolovány z tkání mlžů a kajky. K identifikaci motolic byly použity molekulární metody. Na Svalbardu jsou mlži Mya truncata parazitováni s vysokou prevalencí metacerkáriemi čeledi Gymnophallidae, s menší prevalencí i mlži Hiatella arctica. Oba druhy jsou významnou složkou potravy kajek Somateria mollissima. Je tedy pravděpodobné, že kajka je definitivním hostitelem této motolice. Úkolem této práce je hypotézu potvrdit ztotožněním DNA metacerkárií z mlžů a motolice z kajky. Posledním cílem bylo vypracovat literární rešerši o motolicích čeledi Gymnophallidae. Provedla jsem izolaci DNA jednotlivě z jedinců motolic pomocí tří různých postupů. První izolace byla provedena fenol-chloroformem z materiálu uloženého v pufru TNES. Dále s využitím kitu DNeasy Blood and Tissue (Qiagen), a to s pomocí tekutého dusíku k rozmělnění tkáně a bez tekutého dusíku. Následujícím krokem byla polymerázová řetězová reakce (PCR) amplifikace vnitřních přepisovaných mezerníků (ITS rDNA) a oblasti genu cytochrom oxidasy - podjednotky I (COI) mitochondriální DNA (mtDNA). Získané PCR produkty jsem vizualizovala pomocí elektroforézy a fragmenty o hledané velikosti jsem izolovala pomocí kitů QIAquick Spin (Qiagen) a Gene All Expin Combo (GeneAll). Přečištěné PCR produkty jsem odeslala firmě Seqme, která z nich připravila sekvence. Totožnost s metacerkáriemi Hiatella arctica nebyla prokázána, pravděpodobně z důvodu špatné amplifikace DNA metacerkárie z Hiatella arctica nebo nedostatku získané templátové DNA v PCR. Následné klonování DNA metacerkárie z Hiatella arctica se nezdařilo. Juvenilní motolice čeledi Gymnophallidae izolovaná ze střeva kajky je totožným druhem s metacerkáriemi z Mya truncata.