Příprava rekombinantních proteinů DS47 a IDGF3 v bakulovirovém expresním systému a jejich funkční testy na buňkách <i>Drosophila melanogaster in vitro</i>

Abstract

Cílem této práce byla příprava dvou rekombinantních růstových faktorů Drosophila melanogaster, DS47 a IDGF3. Fragmenty cDNA kódující tyto dva proteiny byly zaklonovány do přenosového vektoru a v Escherichia coli rekombinovány do bakulovirové sekvence ve formě bakmidu. Rekombinantní bakulovirová DNA byla transfekována do hmyzích buněk. Bakulovirem infikované buňky exprimovaly proteiny s histidinovou kotvou, které byly z média purifikovány afinitní chromatografií na kolonce s niklovou agarózou. Funkce izolovaných rekombinantních proteinů byla otestována in vitro testy přežívání buněk v kultuře.