Návrh a testování multiplex-PCR primerů pro detekci původců bakteriální skvrnitosti rajčete

Abstract

Předmětem této práce je vývoj metody multiplex-PCR pro specifickou detekci komplexu fytopatogenních bakterií rodu Xanthomonas, způsobujících bakteriální skvrnitost rajčete. V rámci této práce byly vyvinuty PCR primery pro detekci skupin A (X. euvesicatoria), B (X. vesicatoria), C (X. perforans) a D (X. gardeneri). Na základě sekvencí DNA získaných sekvenováním a z databáze GenBank (NCBI) byly navrženy 4 páry primerů - Xe_shotgun_104, Xe_shotgun_1819, Xv_atpD_403 a Xp_efP_202, které následně byly důkladně testovány a optimalizovány pro paralelní detekci uvedených bakterií. Specificita primerů byla testována na rozsáhlém souboru bakteriálních kmenů patogenních pro rajče a příbuzné plodiny. Dodržením popsaného protokolu lze rychle a spolehlivě identifikovat bakterie X. vesicatoria, X. euvesicatoria, X. perforans a X. gardneri v jediné reakci multiplex-PCR.