PCR diagnostika Neoehrlichia mikurensis

Abstract

Tato bakalářská práce se zabývá vývojem nové diagnostické metody na stanovení bakterie Candidatus Neoehrlichia mikurensis v klíšťatech. Nová metoda byla vyvinuta na základě nedostupnosti vhodné diagnostické metody N. mikurensis, a také z důvodu nedostatečně přesných údajů o promořenosti klíšťat patogenem Candidatus Neoehrlichia mikurensis v odborné literatuře. V teoretické části se zabývám obecnými informacemi o klíšťatech a jimi přenášenými chorobami, které mohou být bakteriálního, virového či protozoálního původu. Onemocnění, která jsou v této práci popsána, jsou borelióza, klíšťová encefalitida, ehrlichióza, bartonelóza, tularémie a babesióza. Zvláštní pozornost je věnována nově detekovanému původci neoehrlichiózy. Při vývoji nové diagnostické metody bylo využito velké množství laboratorních technik, jako je polymerázová řetězová reakce (PCR), klonování, sekvenování a elektroforéza v agarózovém gelu (ELFO). Tyto metody jsou doplněny velkým množstvím rozdílných laboratorních postupů, jako je izolace DNA, minipreparace plazmidové DNA, přečištění DNA z gelu a příprava bakteriálního zásobního roztoku. Statistické vyhodnocení bylo provedeno na základě analýzy směsných vzorků po 10 klíšťatech, pomocí metody PCR. Testování proběhlo celkem z 1390 klíšťat v průběhu roku 2018.