Porovnání metod ECLIA a ELISA při stanovování beta-CrossLaps

Abstract

Osteoporóza je velmi starým onemocněním postihujícím velkou část populace. Její výskyt stále narůstá. Jedná se o systémové onemocnění kostí, pro které jsou charakteristické úbytky anorganické i organické části kosti. Typickými projevy jsou osteoporotické zlomeniny. Pro včasnou diagnostiku nemoci, je třeba provést potřebná vyšetření. Jedním z nich je i laboratorní stanovení markerů kostní resorpce a novotvorby pro zjištění stavu kostního metabolismu. Cílem mé bakalářské práce bylo stanovit hladiny markeru kostní resorpce (beta-CrossLaps) pomocí metod ELISA a ECLIA na stejných sérech od pacientů s diagnostikovanou osteoporózou a výsledky statisticky zpracovat. V teoretické části práce jsem se zaměřila na současné poznatky o osteoporóze. Popsala jsem definici osteoporózy, její historii a epidemiologii. Nastínila jsem, jaké druhy osteoporózy rozlišujeme. Dále jsem se věnovala klinickým příznakům nemoci,a koho všeho může tato choroba postihnout. Poté jsem uvedla možnosti diagnostiky a léčby osteoporózy. V další části jsem se zabývala stavbou a funkcemi kostí. Potom jsem se věnovala markerům kostní novotvorby a resorpce. Nakonec jsem se zmínila o kostním metabolismu a jeho řídících mechanismech. Zaměřila jsem se hlavně na metabolismus vápníku, vitamín D, parathormon a kalcitonin. Praktickou část své bakalářské práce jsem prováděla v akreditované soukromé laboratoři STAFILA, spol. s r. o. v Českých Budějovicích. Při práci jsem postupovala podle standardních operačních postupů laboratoře. Ve výzkumu jsem zanalyzovala celkem 66 sér od pacientů s osteoporózou. Nejdříve jsem stanovila koncentrace beta-CrossLaps metodou založenou na principu sendvičové ELISA na přístroji NexGen Four od firmy TestLine. Poté jsem ty samé vzorky zanalyzovala na automatickém analyzátoru IDS-iSYS od společnosti IDS, tentokrát metodou ECLIA. V metodické části práce popisuji oba přístroje, na kterých jsem stanovení prováděla, dále principy obou metod, použité analytické soupravy a vlastní postupy analýzy. V další části bakalářské práce uvádím výsledky mého měření. Nejdříve jsem zanesla do tabulky koncentrace beta-CrossLaps v ng/ml změřené oběma metodami a u příslušných vzorků jsem uvedla pohlaví a roky narození jednotlivých pacientů. Dále jsem zhotovila graf, který vyjadřuje zastoupení mužů a žen různých věkových kategorií v mém výzkumu. Druhý graf poukazuje na odlišnosti hodnot koncentrací beta-CrossLaps mezi oběma metodami. Výsledné koncentrace jsem poté podrobila regresní analýze. Využila jsem lineární regresi a Grubbsův test pro zjištění odlehlých hodnot, které jsem z dalšího statistického zpracování vyloučila. Ze zbylých hodnot jsem provedla Passing-Bablokovu regresi. Z výsledné regresní rovnice a 95% intervalů spolehlivosti směrnice B a úseku A se zamítla proporcionální chyba měření, ale naopak potvrdila chyba systematická. Korelační koeficient R = 0,97 vykazuje velmi dobrou lineární závislost mezi oběma metodami. Praxí v laboratoři se ukázalo, že vyhodnocení koncentrací beta-CrossLaps od stejných pacientů na dvou různých přístrojích může vykazovat částečně odlišné hodnoty. Pracovala jsem na dvou odlišných analyzátorech, každý byl založen na jiném principu, s odlišnou citlivostí a nakalibrováním. Vše mohlo mít vliv na výslednou koncentraci jednotlivých vzorků. Předností automatického analyzátoru IDS-iSYS je rychlejší stanovení. Dále lze na tomto přístroji provést všechna potřebná vyšetření ohledně kostního metabolismu, od vitamínu D, parathormonu, osteokalcinu až po kostní markery. Je to výhodné pro pacienty s osteoporózou, ale i dalšími metabolickými onemocněními skeletu. Všechna potřebná vyšetření se tak provedou na jednom přístroji.