Transformace ptDNA <i>Chlamydomonas reinhardtii</i>

Abstract

Cílem této magisterské práce bylo vyzkoušet a porovnat dvě dostupné metody genetické transformace (biolistika, elektroporace) u plastidového genomu zelené řasy Chlamydomonas reinhardtii. Při biolistické transformaci byla optimalizována celá škála experimentálních parametrů, které obecně transformační účinnost ptDNA ovlivňují: fyziologický stav akceptorových buněk, typ a velikost použitých mikročástic, tlak hnacího plynu (hélia), délka dráhy letu mikročástic, transformace buněk přímo na selekčním médiu (obsahující spektinomycin 150 ?g/ml) či na médiu neselekčním(bez spektinomycinu) a forma vnášené DNA. Na rozdíl od jaderné transformace nebyla dosud transformace ptDNA pokusného organismu Ch. reinhardtii prostřednictvím elektroporace popsána. Právě proto zde bylo testováno široké spektrum hodnot různých fyzikálních veličin, které mohou podstatným způsobem účinnost transformace ovlivnit.