Motolice čeledi Gymnophallidae na Svalbardu
Abstrakt
Tato bakalářská práce se zabývá molekulárně biologickým potvrzením
předpokládaného životního cyklu motolice čeledi Gymnophallidae. Mezihostiteli
jsou mlži Mya truncata, Hiatella arctica a definitivním hostitelem je kajka mořská
Somateria mollissima. Fixované vzorky motolic byly přivezeny ze Svalbardu, kde
byly izolovány z tkání mlžů a kajky. K identifikaci motolic byly použity molekulární
metody.
Na Svalbardu jsou mlži Mya truncata parazitováni s vysokou prevalencí
metacerkáriemi čeledi Gymnophallidae, s menší prevalencí i mlži Hiatella arctica.
Oba druhy jsou významnou složkou potravy kajek Somateria mollissima. Je tedy
pravděpodobné, že kajka je definitivním hostitelem této motolice. Úkolem této práce
je hypotézu potvrdit ztotožněním DNA metacerkárií z mlžů a motolice z kajky.
Posledním cílem bylo vypracovat literární rešerši o motolicích čeledi
Gymnophallidae.
Provedla jsem izolaci DNA jednotlivě z jedinců motolic pomocí tří různých
postupů. První izolace byla provedena fenol-chloroformem z materiálu uloženého
v pufru TNES. Dále s využitím kitu DNeasy Blood and Tissue (Qiagen), a to s
pomocí tekutého dusíku k rozmělnění tkáně a bez tekutého dusíku. Následujícím
krokem byla polymerázová řetězová reakce (PCR) amplifikace vnitřních
přepisovaných mezerníků (ITS rDNA) a oblasti genu cytochrom oxidasy -
podjednotky I (COI) mitochondriální DNA (mtDNA). Získané PCR produkty jsem
vizualizovala pomocí elektroforézy a fragmenty o hledané velikosti jsem izolovala
pomocí kitů QIAquick Spin (Qiagen) a Gene All Expin Combo (GeneAll). Přečištěné
PCR produkty jsem odeslala firmě Seqme, která z nich připravila sekvence.
Totožnost s metacerkáriemi Hiatella arctica nebyla prokázána, pravděpodobně
z důvodu špatné amplifikace DNA metacerkárie z Hiatella arctica nebo nedostatku
získané templátové DNA v PCR. Následné klonování DNA metacerkárie z Hiatella
arctica se nezdařilo.
Juvenilní motolice čeledi Gymnophallidae izolovaná ze střeva kajky je totožným
druhem s metacerkáriemi z Mya truncata.