Optimalizace metody PCR pro vyšetření polymorfismu v genu PAI-1
Abstrakt
Inhibitor aktivátoru plazminogenu-1 (PAI-1) je důležitým biomarkerem fibrinolýzy. Tento glykoprotein působí jako hlavní inhibitor aktivátorů plazminogenu a jeho vysoká hladina v plazmě je asociována s různými typy onemocnění, například kardiovaskulárními chorobami či maligními nádory. PAI-1 gen je lokalizován na chromozomu 7 v oblasti 7q22.1. V promotoru genu byl v roce 1993 objeven polymorfismus 4G/5G. Alela 4G zvyšuje expresi genu PAI-1 a to vede k vyšší plazmatické hladině tohoto inhibitoru. Právě proto se tento polymorfismus stal předmětem mnoha studií.
Hlavním cílem mé bakalářské práce byla optimalizace metody ARMS-PCR pro vyšetření polymorfismu 4G/5G v genu PAI-1. Dalšími cíli bylo sepsání odborné rešerše na dané téma a osvojení postupů používaných v genetické laboratoři (izolace DNA, měření koncentrace DNA, Real-time PCR).
V teoretické části popisuji PAI-1 gen a jeho produkt. Zabývám se především rolí tohoto inhibitoru v mechanismu fibrinolýzy a jeho vlivem na různá onemocnění. Dále jsem uvedla přehled metodických přístupů, používaných pro genetickou analýzu polymorfismu 4G/5G v genu PAI-1.
V rámci praktické části jsou uvedeny postupy optimalizace metody ARMS-PCR a vlastní výsledky udávající frekvenci genotypů vyšetřovaného souboru získané metodou Realtime PCR, kdy byl použit komerční kit. Optimalizace metody ARMS-PCR nebyla úspěšná.