Validace metody PCR-RFLP pro stanovení laktózové intolerance

Abstract

Laktózová intolerance je nejběžnější potravinovou intolerancí, vyskytující se celosvětově. Jedinci s laktózovou intolerancí nedokáží v tenkém střevě tvořit enzym laktázu, který by štěpil laktózu obsaženou v mléce. Existuje několik možností, jak k tomuto postižení dochází.

Praktická část této bakalářské práce je zaměřena na genetický původ laktózové intolerance. V evropské populaci se nejčastěji vyskytují dva polymorfismy genu MCM6, zásadně ovlivňujícího tvorbu laktázy C/T 13910 a G/A 22018. Principielně se jedná se o nové mutace v genu, které zajišťují tvorbu enzymu laktázy i v dospělosti.

Cílem práce je vypracovat rešerši vycházející s recentních poznatků publikovaných v odborné literatuře. Kdy budou popsány všechny typy laktózové intolerance a možnosti její diagnostiky, dále např. princip alergie, laboratorní metody použité v mé práci, pravidla pro validaci metody apod Vysvětleny budou také výhody i nevýhody každého testovacího přístupu.

V praktické části je cílem provedení validace genetického testu použitého pro stanovení laktózové intolerance a vypracování validačního protokolu, který bude sloužit jako podklad pro mou práci. Genetické vyšetření je založeno na principu PCR RFLP, v rámci metodiky budou popsány laboratorní postupy používané v genetické laboratoři. Výsledkem validace bude zjištění, zda je použitá metoda dostatečně validní pro diagnostiku.

Genetická analýza bude zaměřena na dva vybrané polymorfismy C/T 13910 a G/A 22018. Pro validaci bude použit vzorek se známým genotypem, který byl již dříve ověřen sekvenací.